Биология настоящих мух очень разнообразна, и её трудно охарактеризовать в целом. Большая часть входящих в семейство видов развивается в гниющих органических остатках растительного и животного происхождения, где личинки прирабатывают либо сами остатки, либо хищничают. Ряд видов является вредителями растений. Нет в составе семейства только специализированных паразитов, хотя паразитизм в наиболее примитивных, несовершенных формах у этих мух также известен. Многие виды настоящих мух являются синантропными, т.е. более или менее связаны с человеком. Некоторые из них уже не встречаются в дикой природе, вне посёлков и городов.